疏水層析簡介
更新時(shí)間:2021-12-16 點(diǎn)擊次數(shù):3233
疏水層析是根據(jù)分子表面疏水性不同來分離生物大分子的一種方法,和反相層析分離物質(zhì)的依據(jù)是一致的,都是利用疏水介質(zhì)的疏水性配基與流動(dòng)相中的一些疏水分子發(fā)生可逆性結(jié)合而進(jìn)行分離。根據(jù)蛋白質(zhì)的疏水性差異,在高鹽溶液中,蛋白質(zhì)會與疏水配基相結(jié)合,而其他的雜蛋白則沒有這種性質(zhì),可以將蛋白質(zhì)初步的分離,用于蛋白質(zhì)鹽析之后的進(jìn)一步提純。
1. 采用了鹽的水溶液作為流動(dòng)相,色譜條件溫和,生物大分子的活性回收率很高。
2. 蛋白質(zhì)在HIC操作過程中是高鹽上樣,低鹽洗脫(高鹽濃度的樣品不必作處理就可直接上樣)。
3. 在一次色譜中可同時(shí)實(shí)現(xiàn)出去鹽酸胍、蛋白質(zhì)復(fù)性和分離三個(gè)目的。
4. 溫度升高,蛋白質(zhì)天然折疊伸展,暴露出更多內(nèi)部疏水集團(tuán),使蛋白質(zhì)的HIC保留發(fā)生變化。
5. 色譜填料穩(wěn)定性好,鹽水體系作流動(dòng)相無環(huán)境污染。
一類鹽(如Na2SO4、(NH4)2SO4等)可以使溶液中蛋白質(zhì)的構(gòu)象穩(wěn)定,會促進(jìn)蛋白質(zhì)自身間的疏水作用而析出,或者促進(jìn)蛋白質(zhì)與配基之間的疏水作用而保留在柱上,這類鹽叫鹽析性鹽。鹽析性鹽的摩爾表面張力增量也大(除了有特異作用的鹽如CaCl2、MgCl2外)。
有一些鹽,如硫氰酸鹽、鹽酸胍等,會提高蛋白質(zhì)的水溶性,同時(shí)會使蛋白質(zhì)變性,這類鹽叫鹽溶性鹽。鹽溶性鹽的摩爾表面張力增量小。
Phenyl/Butyl/Octyl/Butyl-S Tanrose FF
疏水層析介質(zhì)
Phenyl Tanrose 6FF屬于芳香族疏水介質(zhì),疏水性*。根據(jù)配基取代程度不同分為:高取代(High Sub簡稱HS)和低取代(Low Sub簡稱LS)兩種介質(zhì)。苯基通過不帶電,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的醚鍵連接到瓊脂糖上。
Butyl Tanrose 4FF和Octyl Tanrose 4FF這兩種介質(zhì)屬于脂肪族疏水介質(zhì),Butyl Tanrose 4FF配基為丁基,Octyl Tanrose 4FF 配基為辛基:這兩種配基通過不帶電且化學(xué)穩(wěn)定性的醚鍵同高度交聯(lián)的瓊脂糖偶聯(lián)而成。
Butyl-S Tanrose 6FF是疏水性最弱的疏水介質(zhì),適合在較低鹽濃度條件下純化強(qiáng)疏水性分子,可去除脂肪類,脂蛋白,色素等,在酵母重組表達(dá)乙肝疫苗純化過程中發(fā)揮重要作用。