蛋白質(zhì)純化的必要耗材和儀器
更新時(shí)間:2021-12-20 點(diǎn)擊次數(shù):3907
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蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)室與通常的生物化學(xué)或分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的區(qū)別主要在于蛋白質(zhì)純化的必要耗材和儀器的不同。
實(shí)驗(yàn)室中較常用的設(shè)備是離心機(jī)。蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)室的主力是冷凍高速離心機(jī),轉(zhuǎn)速可達(dá)20000r/min。這種離心機(jī)在實(shí)驗(yàn)室中的實(shí)用性與其所配套的轉(zhuǎn)子、離心管和離心桶種類的多少直接相關(guān)。從幾毫升的離心管到500mL的離心桶所適用的轉(zhuǎn)子都可以買到。大轉(zhuǎn)子在蛋白質(zhì)純化早期步驟中處理大體積的提取物時(shí)是非常有用的。
如果想去除或制備亞細(xì)胞器,使用超速離心機(jī)是比較理想的手段??梢再I到以80000r/min處理適當(dāng)?shù)拇篌w積樣品的離心機(jī),市場(chǎng)上的一些較小機(jī)器的轉(zhuǎn)速甚至更高。這些儀器的有效應(yīng)用可以大大減少制備微粒體或高速離心分離上清液成分所需要的時(shí)間。鑒于這些儀器的高成本和低使用頻率,它們通常在實(shí)驗(yàn)室之間共享。
許多微量分析技術(shù)的出現(xiàn),使迷你離心機(jī)或微量離心機(jī)成為一種必bei的儀器。在蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)室中,它雖然不是一個(gè)直接用于分級(jí)分離的裝置,但卻是一個(gè)必要的補(bǔ)充。基于這些考慮,大型離心機(jī)也經(jīng)常用于不同類型的分析實(shí)驗(yàn),而不僅僅是用于分級(jí)分離。
為了分離蛋白質(zhì),破碎細(xì)胞的裝置是必需的。有各種儀器可達(dá)到這一目的,包括手動(dòng)的和馬達(dá)驅(qū)動(dòng)的勻漿機(jī)、攪拌機(jī)、超聲破碎器和壓力元件等。一般情況下,個(gè)人實(shí)驗(yàn)室裝備各種低成本的設(shè)備,其余的高成本儀器在實(shí)驗(yàn)室之間共享是比較合理的方案。
柱層析是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室所使用的一種主要的蛋白質(zhì)純化方法。進(jìn)行蛋白質(zhì)純化的每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有大量不同長(zhǎng)度和直徑的層析柱,以滿足各種純化目的的需求,因?yàn)樵诩兓?guī)程的不斷改進(jìn)過(guò)程中,這些層析柱都可能會(huì)用到。應(yīng)該備有各種不同精度等級(jí)的層析柱。我們發(fā)現(xiàn),用注射器針頭或管道進(jìn)行液流輸入和控制、裝有塞子、簡(jiǎn)單的、重力引流且敞口的層析柱,已經(jīng)可以滿足絕大部分的色譜純化過(guò)程。然后,在許多情況下,預(yù)裝柱和加壓的快速蛋白質(zhì)液相層析(FPLC)系統(tǒng)可能是首xuan的設(shè)備。
一個(gè)可靠的組分收集器是實(shí)驗(yàn)室最重要的設(shè)備之一。組分收集器的故障可能導(dǎo)致數(shù)月的純化工作被毀掉。在這種情況下,用多余的資金購(gòu)置一個(gè)品質(zhì)優(yōu)良的、多功能的組分收集器是一種明智的選擇。能加載大量的、不同尺寸規(guī)格的試管,擁有不同采集模式的收集器是最shi用的收集器。市面上有多種不同類型的組分收集器可供選擇,在購(gòu)買之前應(yīng)仔細(xì)分析哪種型號(hào)可以滿足預(yù)期需求。購(gòu)買實(shí)驗(yàn)室儀器的一個(gè)合理的策略是購(gòu)買一個(gè)更精密的儀器以滿足某些情況下的特殊需求,并購(gòu)買一個(gè)或多個(gè)低成本的簡(jiǎn)單儀器來(lái)滿足日常使用。
柱層析的很多其他配件盡管不是必需的,但實(shí)用性很強(qiáng),包括蠕動(dòng)泵、各種規(guī)格的梯度儀和紫外線檢測(cè)器。如果需要,梯度儀可以用燒瓶或瓶子自制。在色譜操作過(guò)程中,蛋白質(zhì)洗脫圖提供了重要信息。該信息可以通過(guò)使用分光光度計(jì)檢測(cè)各部分洗脫物的吸收值或使用在線紫外線檢測(cè)器的實(shí)時(shí)檢測(cè)來(lái)獲得。具有不同尺寸流動(dòng)池的雙波長(zhǎng)模式的檢測(cè)器的功能最多,也最昂貴。
最后,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)備有最基本的色譜層析凝膠和樹脂,包括陰離子和陽(yáng)離子交換樹脂、不同孔隙度的凝膠過(guò)濾介質(zhì)、疏水層析凝膠或固相染料樹脂。
每一個(gè)蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)室都必須擁有自己的凝膠電泳設(shè)備。這些設(shè)備用于監(jiān)測(cè)一個(gè)蛋白質(zhì)的純化過(guò)程,或用于分級(jí)分離本身。一般來(lái)說(shuō),配有不同尺寸墊片和梳子的垂直平板凝膠儀已經(jīng)能夠滿足多數(shù)應(yīng)用。電泳儀的電源供應(yīng)器是必需的。如果只購(gòu)買一個(gè)電源供應(yīng)器,具有可調(diào)節(jié)的恒流(0-50mA)、恒壓(0-200V)模式是很有用的。除了制備凝膠所需的化學(xué)藥品之外,也應(yīng)該備有多種蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品和染色染料。用于凝膠電泳的儀器也可用于等電聚焦。
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