中藥成分液相分析常見(jiàn)問(wèn)題——前沿峰
更新時(shí)間:2022-09-05 點(diǎn)擊次數(shù):1096
1. 柱過(guò)載
每一根色譜柱都有其最大樣品承載量,當(dāng)樣品量過(guò)多時(shí)會(huì)出現(xiàn)超載現(xiàn)象,包括質(zhì)量過(guò)載和體積過(guò)載。
2.色譜柱損壞
色譜柱在長(zhǎng)時(shí)間使用之后就會(huì)導(dǎo)致硅膠填料的溶解,柱床崩解,從而柱效降低導(dǎo)致峰前沿。
3.峰干擾
兩個(gè)化合物共洗脫,即在大峰前有小峰出現(xiàn),色譜峰沒(méi)有分開。
4.樣品溶劑的影響
當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。
具體就是說(shuō),樣品在色譜柱中均勻的往前移,我們通常會(huì)得到呈正態(tài)分布的的峰。當(dāng)樣品溶液進(jìn)樣后到達(dá)色譜柱的時(shí)間比較短,在未被流動(dòng)相充分稀釋時(shí),由于洗脫能力比較強(qiáng)的樣品溶劑存在,使部分樣品被洗脫的速度加快,快速通過(guò)色譜柱,最終導(dǎo)致峰前延。
中藥成分分析項(xiàng)目中,提取溶劑通常為乙醇、甲醇、乙酸乙酯等洗脫強(qiáng)度較強(qiáng)的溶劑,此時(shí)易發(fā)生“樣品溶劑的洗脫強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)流動(dòng)相"的情況,為避免前延峰出現(xiàn),可以用通過(guò)“流動(dòng)相稀釋提取液"或降低“進(jìn)樣體積"的方式。
色譜條件:
色譜柱:Ultimate® AKL-C18(4.6×250mm,5μm)。
流速:1.0mL/min;
流動(dòng)相:甲醇:水=1:1.1;
檢測(cè)波長(zhǎng):280nm;
柱溫:30℃;
進(jìn)樣體積:10μL。
色譜圖:
結(jié)論:牛蒡苷峰形前沿,將進(jìn)樣體積降低至5μL,結(jié)果如下:
結(jié)論:通過(guò)降低進(jìn)樣體積有效改善了牛蒡苷的峰形,結(jié)果可滿足《中國(guó)藥典2020版》中相關(guān)要求。