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液相方法開發(fā)案例 | 根據(jù)樣品特性選擇檢測(cè)器和分離模式

更新時(shí)間:2023-07-19 點(diǎn)擊次數(shù):964

液相色譜檢測(cè)方法的建立需要針對(duì)不同的樣品和分析目的,選用不同的分離模式和檢測(cè)器,充分發(fā)揮儀器性能,高效地達(dá)到分析目標(biāo)。通常使用單一檢測(cè)器直接檢測(cè)可達(dá)到目標(biāo),必要時(shí)可衍生化后再檢測(cè),或用多檢測(cè)器組合檢測(cè)。分離模式選擇與檢測(cè)器選擇的原則基本統(tǒng)一,即根據(jù)分析物結(jié)構(gòu)性質(zhì)初步判斷分離模式及流動(dòng)相的選擇:根據(jù)分析物結(jié)構(gòu)性質(zhì)、分離模式、樣品處理方式、流動(dòng)相的選擇等進(jìn)行檢測(cè)器的配套選擇。分離模式和檢測(cè)器的選擇是色譜方法開發(fā)中不可分割的相互統(tǒng)一的重要環(huán)節(jié)。


關(guān)于分離模式和檢測(cè)器的選擇,

以下案例或可說(shuō)明一二


01

脂肪族生物胺檢測(cè)分析

脂肪族生物胺樣品特性:此類物質(zhì)紫外可見光區(qū)吸收極弱,衍生化程序繁瑣效率低且易誤差損失,是水溶性的極性物質(zhì)。

方法開發(fā)思路:根據(jù)這些基本條件,我們判斷可以選擇HILIC模式,ELSD檢測(cè)器直接檢測(cè)。

檢測(cè)效果見下圖:

1.png

月旭Ultimate® HILIC Amphion II

對(duì)四種脂肪族生物胺的分離

微信截圖_20230719094015.png




02

甘油酯檢測(cè)分析

甘油酯樣品特性:此類物質(zhì)為脂溶性大,不溶于水或難溶于甲醇的非極性物質(zhì)。

方法開發(fā)思路:這樣的物質(zhì)適用非水反相色譜法,案例見<非水反相色譜法應(yīng)用案例及注意事項(xiàng)>。

03

氨基酸檢測(cè)

氨基酸樣品特性:部分紫外吸收弱,大極性和水溶性。

方法開發(fā)思路:可選擇衍生化法和非衍生化法。

兩種方法的分離效果見下圖:

2.png

月旭Ultimate® Amino Acid Plus

對(duì)23種氨基酸的非衍生法分離

3.png

月旭Ultimate® Amino Acid

對(duì)19種氨基酸的衍生化法分離




04

單糖寡糖類分析

單糖寡糖類樣品特性:水溶性的極性樣品,弱紫外可見吸收。

方法開發(fā)思路:這類物質(zhì)常選擇示差檢測(cè)器。

圖片

月旭Ultimate® XB-NH2 分析乳果糖

05

蛋白、RNA,病毒等樣品分析

蛋白、RNA,病毒等樣品特性:大分子。

方法開發(fā)思路:選擇體積排阻色譜法。

5.png

月旭Xtimate® SEC-120 分析RNA

7.png

月旭Xtimate® SEC-2000

分析去致病基因的痘病毒

8.png

月旭Xtimate® SEC-300 分析IgG蛋白

關(guān)于流動(dòng)相的選擇,請(qǐng)延申閱讀<高效液相色譜中溶劑與檢測(cè)器的兼容性>。



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