01 什么是酶聯(lián)免疫吸附測定?
酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA),是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。自上世紀(jì)70年代初問世以來,發(fā)展迅速。
ELISA是基于抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)建立起來的一種快速檢測技術(shù), 它將酶促反應(yīng)的高效率和免疫反應(yīng)的高度專一性有機(jī)地結(jié)合起來,可對各種微量有機(jī)物含量進(jìn)行測定。
抗原、抗體小知識
抗原決定簇示意圖
抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)??乖M(jìn)入機(jī)體后,可刺激機(jī)體引起細(xì)胞免疫和產(chǎn)生抗體。抗原的反應(yīng)性取決于抗原決定簇。一個抗原分子可帶有不同的決定簇。
抗原抗體結(jié)合反應(yīng)示意圖
抗體是指能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。
抗原抗體的關(guān)系就如同特定的鑰匙和鎖,一一對應(yīng),只有找到正確的鑰匙--抗原才能打開對應(yīng)的鎖---抗體。
02 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理
1、使抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面,并保持活性。
2、使抗體或抗原與某種酶連接成酶標(biāo)記抗體或抗原。
3、在測定時,把受檢抗體(或抗原)和酶標(biāo)抗原(或抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原(或抗體)一起反應(yīng)。
4、采用洗滌的方法去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗原(或抗體),最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。
5、加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)?/span>有色產(chǎn)物。
6、產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),可以根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來進(jìn)行定性或者定量分析。
03 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分類
間接法(Indirect ELISA):
將已知抗原吸附于固相載體,酶標(biāo)記二抗
檢測待測液體中未知抗體
雙抗體夾心法(Sandwich ELISA):
將已知抗體吸附于固相載體,酶標(biāo)記一抗
檢測待測液體中的可溶性抗原
競爭法(Competitive ELISA):
將已知抗體或抗原吸附于固相載體,酶標(biāo)記抗原或抗體
檢測待測液體中的可溶性抗原或抗體
04 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的優(yōu)勢
1、檢測速度快:可以制備成相應(yīng)檢測試劑盒,多樣品同時檢測,大大縮短檢測時間。
2、特異性強(qiáng):其利用抗原與抗體的特異性結(jié)合測定,具有選擇性高的特點(diǎn)。
3、靈敏度高:結(jié)果的準(zhǔn)確性和方法的靈敏度與儀器分析方法一致。
4、操作簡單:不需要大型儀器設(shè)備,試劑盒可以直接處理,不需要二次加工。
5、便于推廣:對試驗(yàn)人員的技術(shù)要求不高,便于技術(shù)推廣。
05 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的應(yīng)用
由于酶聯(lián)免疫法具有快速、操作方便、靈敏度高的特點(diǎn),適用于現(xiàn)場檢測,其應(yīng)用范圍也在不斷擴(kuò)大,目前已被廣泛應(yīng)用于食品檢測和醫(yī)學(xué)檢測中。在食品檢測中主要用于檢測植物性食品的農(nóng)藥殘留、動物性食品的獸藥殘留、真菌毒素、食源性微生物及食品中特殊蛋白質(zhì)、重金屬等。