親和色譜填料結(jié)構(gòu)
更新時(shí)間:2021-12-10 點(diǎn)擊次數(shù):2389
親和層析是根據(jù)一種生物分子間的特異相互作用來(lái)分離物質(zhì)的層析方法,利用待分離物質(zhì)與配體間所具有的特異性親和力來(lái)達(dá)到分離目的的一類(lèi)特殊層析技術(shù)。如抗原與抗體、DNA與RNA、酶與底物或抑制物等。
基體是有一定粒度、一定剛性、多孔的表面有大量可反應(yīng)基團(tuán)的固體物質(zhì),用于支撐間隔臂和配體,在其表面通過(guò)反應(yīng)鍵合上間隔臂和配體后制得親和色譜填料?;w有兩類(lèi):一類(lèi)是有機(jī)聚合物,如纖維素、交聯(lián)葡聚糖、交聯(lián)瓊脂糖等;第二類(lèi)是多孔玻璃和硅膠。
基體應(yīng)具備的條件:
1.基體是不溶性支持物,具有三維的多孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),有足夠大的排阻極限,大分子能不受阻礙地進(jìn)出內(nèi)孔。
2.基體顆粒應(yīng)該是均勻的球形并具剛性,粒度均勻,孔徑分布范圍小,機(jī)械性能好。
3.基體必須是親水性及惰性的,其骨架與蛋白質(zhì)或其他重要生化物質(zhì)的作用必須極弱,以降低非特異性吸附。
4.基體理化性質(zhì)穩(wěn)定,不會(huì)被制備填料時(shí)的試劑和流動(dòng)相破壞。
5.基體必須具有大量表面活性基團(tuán)。
配體是接到基體或間隔臂上與蛋白質(zhì)分子發(fā)生作用的部分,配體的選擇是親和色譜的關(guān)鍵。配體有兩類(lèi):一類(lèi)叫特異性配體,只對(duì)一種蛋白質(zhì)具有結(jié)合能力;另一類(lèi)叫組特異性配體,也叫通用性配體,對(duì)某一類(lèi)蛋白質(zhì)具有結(jié)合能力。
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| 配體既要能有效地與生物分子結(jié)合,親和力相當(dāng),又能有效地與所吸附的生物分子解離。 |
| 配體既有能特異性地與待純化的蛋白質(zhì)分子相結(jié)合的活性點(diǎn),又有與基體或間隔臂相偶聯(lián)的化學(xué)基團(tuán)。 |
| 配體自身應(yīng)具有良好的穩(wěn)定性,能耐受偶聯(lián)以及洗脫時(shí)的溫度變化和化學(xué)環(huán)境,制得的填料可以多次重復(fù)使用。 |
盡可能選擇無(wú)離子基團(tuán)、疏水性小的的配體。
親和色譜分離對(duì)象是生物大分子,其體積大,并且只能以特定的部位與配基作用,通常因?yàn)榭臻g位阻效應(yīng),使其作用位點(diǎn)不易接近配體。所以,一般在配體與基體之間接上一個(gè)有一定長(zhǎng)度的間隔臂,使配體伸離基體表面一定的距離,就可以克服這空間阻礙。
間隔臂的兩端都有能與其他基團(tuán)反應(yīng)的活性官能團(tuán),活性官能團(tuán)如NH2、OH、COOH等,它的一端先與基體反應(yīng),形成帶間隔臂的基體,產(chǎn)物仍帶一個(gè)可反應(yīng)的端基,可以再與配體偶聯(lián)。
親水性的、無(wú)離子基團(tuán)的、沒(méi)有太多支鏈或大基團(tuán)的、適當(dāng)鏈長(zhǎng)的小分子適合作間隔臂。
1. Protein A Solid/Protein A 4FF/Protein G Tanrose 4FF 抗體親和介質(zhì)
2. Ni Tanrose 6FF(NTA/IDA)/Ni Tanrose 6HP(NTA)/Ni Tanrose 4FF (NTA/IDA)/Co Tanrose 6FF(NTA)金屬螯合親和介質(zhì)
3. IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金屬螯合親和介質(zhì)
4. Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒親和介質(zhì)
5. GST Tanrose 4FF谷胱甘肽親和介質(zhì)
6. Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素親和介質(zhì)
7. Endotoxin rem Tanrose 4FF內(nèi)毒素親和填料
8. NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF預(yù)活化親和填料